Nová série začíná tři roky po skončení druhé řady.
Úvodní díl startuje hodinu po poledni, kdy agent Jack Bauer v podání Kiefera Sutherlanda těžce překonává vlastní drogovou závislost a současně zjistí, že jistý vězeň osnuje s pomocí svého bratra novou hrozbu.
Dělený obraz opět propojuje několik souběžných dějů: je nalezen muž zabitý smrtícím virem, jímž teroristé hrozí zaplavit celé Spojené státy v čele s Los Angeles, kde je právě prezident Palmer cítící už příznaky záhadné nemoci, sáček s vražedným práškem zrádně připomínajícím obyčejný kokain má v rukou nic netušící mladík, přímo v ústředí protiteroristické jednotky sedí zrádce a navíc tam už pracuje i hrdinova dcera. Virus – jak jinak – zabíjí do čtyřiadvaceti hodin.
První řadu, v níž Bauer bránil atentátu na prezidenta, vysílala Nova od února 2004, druhou řadu, kde hrdina odvracel atomový výbuch, Nova uváděla loni od září.